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供应RNA pull down实验服务

  • 发布时间:2024年08月08日
  • 有 效 期:2025年02月07日
详细说明

    RNA pull down实验原理





先将体外转录的RNA结合到Beads上,再将RNA-Beads和细胞裂解液孵育,这样与目标RNA结合的蛋白便会一起吸附在Beads上。洗涤掉不结合的蛋白后,用洗脱液将RNA-protein复合物从Beads洗脱下来,之后可以采用Western Blot技术检测特定的结合蛋白,还可以采用质谱方法鉴定与目标RNA结合的未知蛋白。









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RNA pull down应用背景





RNA结合蛋白(RNA binding protein,RBP)是一类功能强大而广泛的调节因子,约占细胞编码的所有蛋白的5%~10%。目前除了少数RNA以核酶形式单独发挥功能,大部分RNA通过与蛋白结合形成RNA-蛋白复合物来发挥作用。







一方面,RBP参与RNA合成、可变剪接、修饰、转运、翻译及胞内定位等多个转录后调控过程,调控mRNA稳定性、lncRNA活性、miRNA沉默复合体形成等生物学过程;另一方面,RNA也会调节这些蛋白质的活性、定位或与其他蛋白质相互作用,从而影响RBP介导的各种细胞事件。RNA与蛋白质的相互作用对于维持细胞稳态是非常重要的,干扰这种相互作用将会导致细胞功能失调和相关疾病的发生。







目前研究RNA-蛋白质相互作用的方法分为两大类:一是以感兴趣的RNA为中心,寻找与该RNA结合的蛋白质;二是以感兴趣的蛋白质为中心,寻找与该蛋白质结合的RNA。RNA pull down属于前者,通过体外转录的方式将感兴趣的RNA带上标签,通过该标签使RNA结合到树脂支持物上,再加入样本蛋白质与RNA结合,洗涤、洗脱得到与目标RNA结合的蛋白质。







RNA pull-down 实验服务研究案例—客户文章解析





RNA pull down实验外包技术服务结果



lncRNA LAMP5-AS1通过调控DOT1L甲基转移酶活性促进MLL白血病发展











研究结论





lncRNA LAMP5-AS1在MLL白血病细胞的自我更新过程和分化阻滞

 
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